关于小鼠乳腺癌博业体育app下载安装手机版 的冻存及复苏操作方法你知道么

　　关于01体育 的冻存及复苏操作方法你知道么?今天就让我们一起来了解一下吧。
 

　　一、小鼠乳腺癌博业体育app下载安装手机版 冻存操作要点：
 

　　1、博业体育app下载安装手机版 冻存前12~24h，换新鲜培养基，使博业体育app下载安装手机版 一直处于对数生长期。
 

　　2、待博业体育app下载安装手机版 长至80%汇合时胰酶消化，用新鲜培养基吹打后制成博业体育app下载安装手机版 悬液，1000rpm离心10min。悬浮博业体育app下载安装手机版 则直接离心。
 

　　3、弃上清，加入冻存液重悬博业体育app下载安装手机版 沉淀，调整博业体育app下载安装手机版 浓度为3×106~1×107cells/mL。将博业体育app下载安装手机版 悬液分至冻存管内，每管1~1.5mL，拧紧盖子。在管壁上做好标记，标明博业体育app下载安装手机版 名称、冻存日期等。(博业体育app下载安装手机版 冻存液配方可为胎牛血清：培养基：DMSO=4：5：1或胎牛血清：培养基：DMSO=1：8：1或胎牛血清：DMSO=9：1，可根据各实验室实际条件调整)
 

　　4、按下列顺序依次降温：室温→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃过夜→液氮保存。也可使用程序降温盒更为方便，博业体育app下载安装手机版 冻存管放入程序降温盒内可直接放入-80℃过夜，再转至液氮罐内。注意程序降温盒内异丙醇的量必须高于低刻度线;冻存5次后异丙醇需要跟换一次，以免影响冻存效果。
 

　　5、博业体育app下载安装手机版 冻存后应取出一管复苏，检测博业体育app下载安装手机版 的存活率。理论上博业体育app下载安装手机版 可在液氮内长期保存，为稳妥起见可在博业体育app下载安装手机版 冻存半年后复苏培养，观察博业体育app下载安装手机版 生长情况，再继续冻存。
 

　　二、小鼠乳腺癌博业体育app下载安装手机版 复苏操作要点：
 

　　1、将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
 

　　2、将冻存博业体育app下载安装手机版 从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，博业体育app下载安装手机版 冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管，使博业体育app下载安装手机版 能在1~2min内*解冻，使博业体育app下载安装手机版 能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中，避免引起污染。
 

　　3、用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内博业体育app下载安装手机版 转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使博业体育app下载安装手机版 均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
 

　　4、800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成博业体育app下载安装手机版 悬液。
 

　　5、将博业体育app下载安装手机版 悬液转移至T25博业体育app下载安装手机版 瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动博业体育app下载安装手机版 瓶使博业体育app下载安装手机版 分布均匀，放入温箱内培养。
 

　　6、第二天观察博业体育app下载安装手机版 贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死博业体育app下载安装手机版 。继续培养，待博业体育app下载安装手机版 长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的博业体育app下载安装手机版 需经过2~3次传代，博业体育app下载安装手机版 活力恢复后才能进行后续的实验。
 

　　对DMSO不敏感的博业体育app下载安装手机版 在复苏时也可不离心，减少操作步骤，也可降低污染的几率。将解冻的博业体育app下载安装手机版 悬液直接转移至T25博业体育app下载安装手机版 瓶内，补加新鲜培养基，放入温箱内培养。但培养12~20h后必须换新鲜的培养基，移除死博业体育app下载安装手机版 。